晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)檢測說明書
研究發(fā)現(xiàn)AGEs的來源主要是葡萄糖,還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。目前確定結(jié)構(gòu)屬于AGE的單體化合物有CML、CEL、Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin等,針對這些化合物和AGEs、AGE1~4生產(chǎn)的抗體大量應(yīng)用于生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,發(fā)表的相關(guān)論文一一都證實了AGEs是老化、與老化相關(guān)的慢性疾病發(fā)生的重要影響因素。
上海恒遠生物科技有限公司晚期糖基化終端產(chǎn)物(AGEs)試劑盒*,提供技術(shù)指導(dǎo)。您的咨詢與訂購,: 手機 :何
檢 測 原 理
葡萄糖來源的AGEs (Glc-AGEs)ELISA試劑盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。如右圖所示,96孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中Glc-AGEs的特異性抗原位點, 然后使用HRP標記的anti-AGE抗體結(jié)合Glc-AGEs形成“三明治”復(fù)合物,zui后酶顯色對樣品進行定性和定量研究。
檢 測 對 象
人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細胞裂解液。
試 劑 盒 成 分
(1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate
(2) Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2
(3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1
(4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60 uL×1 (mouse monoclonal antibody)
(5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.
(6) Substrate solution, 30 mL×1
(7) Stop solution, 15 mL×1
(8) Wash buffer concentrate (×20) , 30 mL×1
(9) Dilution plate, 1 plate
實 驗 準 備
工
作
液
配
制 | 清 洗 液 | 使用前確保wash buffer濃縮液內(nèi)無結(jié)晶顆粒,往30 ml的濃縮液內(nèi)加入570 ml去離子水即為工作液,此溶液可以保存在2 |
抗體稀釋液 | 用10倍體積的清洗液稀釋"Reference standard and sample diluent"即可。 | |
標 準 溶 液 | 用等體積"Reference standard and sample diluent" 稀釋"Glucose-derived AGEs standard"(500ng/ml),如下圖所示,依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。 | |
HRP標記-AGEs 抗體(100×) | 用5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋50ul 的HRP-anti AGEs antibody濃縮液,稀釋后的抗體不能保存。 | |
顯 色 液 | 在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可,此溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。 | |
待測樣品的準備 | 用"Reference standard and sample diluent"稀釋樣品,若樣品濃度非常高,需用PBS進行預(yù)稀釋,zui后再調(diào)整濃度至100×或更高。 |
實 驗 準 備
1 | 96孔板準備 | 加入300 ul的清洗液至每個孔內(nèi),溫育30 min;*倒掉孔內(nèi)溶液后,再加入300ul 清洗液。再重復(fù)此步2次。 |
2 | 一 抗 反 應(yīng) | 按50 ul/孔的量加入標準溶液、稀釋樣品孵育1 hour,可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。 |
3 | 二 抗 反 應(yīng) | 加50 ul/孔的100倍稀釋的HRP- anti AGEs antibody,孵育1 hour。孵育完成后吸去反應(yīng)液,用300 ul清洗液清洗3次。 |
4 | 顯 色 | 加100 ul/孔顯色液,孵育10 min; |
5 | 終 止 反 應(yīng) | 加100ul/孔終止液終止酶顯色反應(yīng); |
6 | 讀取吸光度 | 酶標儀在490 nm下讀取吸光值; |
7 | 計 算 結(jié) 果 | 使用標準曲線計算出AGEs的濃度,使用4-Parameter Logistic Model分析數(shù)據(jù)。 |